Hasta ahora, en el Laboratorio Valladares, todas nuestras pruebas de PCR en diagnóstico molecular veterinario se realizaban mediante la técnica de PCR a tiempo final. Sin embargo, con el objetivo de mejorar la precisión, rapidez y fiabilidad de nuestros análisis, hemos iniciado la transición a la PCR a tiempo real (qPCR).
Este cambio no solo implica el uso de nuevas plataformas tecnológicas, sino que además estamos desarrollando nuestros propios diseños de PCR a tiempo real para el análisis de enfermedades infecciosas en veterinaria. Esto nos permite optimizar protocolos, adaptándolos a los patógenos, y garantizar una mayor sensibilidad y especificidad en el diagnóstico.

Diferencias Técnicas: PCR a Tiempo Final vs. PCR a Tiempo Real
La PCR a tiempo final ha sido el método convencional en diagnóstico molecular, basado en la amplificación exponencial del ADN y su posterior detección mediante electroforesis en gel de agarosa o técnicas colorimétricas. Sin embargo, esta metodología presenta algunas limitaciones:
- No permite cuantificación exacta: Solo detecta la presencia o ausencia del ADN diana sin medir su cantidad.
- Tiempo de respuesta más largo: La necesidad de manipulación post-PCR aumenta el tiempo total del análisis.
- Mayor riesgo de contaminación: El manejo de los productos amplificados incrementa la posibilidad de contaminación cruzada.
Por otro lado, la PCR a tiempo real (qPCR) permite la detección de la amplificación en tiempo real mediante sondas fluorescentes o intercalantes de ADN (Heid et al., 1996). Esto ofrece ventajas clave:
- Monitorización en tiempo real: Se evalúa la amplificación en cada ciclo sin necesidad de manipulación post-PCR.
- Mayor sensibilidad y especificidad: Detección de cargas virales o bacterianas mínimas, útil para infecciones subclínicas.
- Cuantificación relativa: Se puede estimar la cantidad de ADN o ARN en la muestra mediante el análisis del Cycle Threshold (Ct).
qPCR: Una Técnica Pseudo-Cuantitativa Basada en el Ct
La qPCR es una técnica pseudo-cuantitativa, ya que su interpretación se basa en el Cycle Threshold (Ct).
El Ct representa el número de ciclos necesarios para que la fluorescencia de la reacción supere un umbral determinado, lo que es inversamente proporcional a la cantidad de ADN en la muestra (Nolan et al., 2006).
Un Ct bajo implica una carga del agente alta y viceversa. El Ct permite una estimación relativa de la carga patogénica, crucial para evaluar infecciones persistentes o monitorear respuestas a tratamientos.
La qPCR es especialmente útil para monitorear la carga del antígeno en infecciones crónicas, permitiendo ajustar tratamientos y mejorar la gestión clínica de enfermedades persistentes (Bustin et al., 2009).
Desarrollo de Nuestras Propias PCR a Tiempo Real
Como parte de nuestro compromiso con la innovación y la optimización del diagnóstico molecular veterinario, en Laboratorio Valladares estamos diseñando nuestras propias PCR a tiempo real, dirigidas a la detección de enfermedades infecciosas en animales.
Este desarrollo nos permite:
🔬 Personalizar
y optimizar protocolos adaptados a los patógenos de interés en nuestra
región.
🔬 Mejorar la
sensibilidad y especificidad de las pruebas, asegurando una detección más
fiable.
🔬 Reducir
tiempos de procesamiento, entregando resultados más rápidos a los clínicos
veterinarios.
🔬 Mantener
el control total del diseño y validación de las pruebas, garantizando su
eficacia.
Innovación en Laboratorio Valladares
Con la transición de nuestras pruebas de diagnóstico molecular veterinario a PCR a tiempo real, y el desarrollo de nuestros propios ensayos qPCR, en Laboratorio Valladares consolidamos un servicio de diagnóstico más preciso, rápido y eficiente para veterinarios en Canarias.
Si deseas más información sobre esta transición y cómo la qPCR puede mejorar el diagnóstico de tus pacientes, no dudes en contactarnos.
Artículo escrito por:
María Valladares Salmerón DVM PhD
Referencias
- Bustin SA, Benes V, Garson JA, et al. (2009). The MIQE guidelines: Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments. Clinical Chemistry, 55(4), 611-622.
- Heid CA, Southwick K, et al. (1996). Real-time quantitative PCR. Genome Research, 6(10), 986-994.
- Nolan T, Hands RE, Bustin SA. (2006). Quantification of mRNA using real-time RT-PCR. Nature Protocols, 1(3), 1559-1582